Metóda 1: Metóda extrakcie (Metóda, ktorá sa v súčasnosti používa v mojej krajine; poskytuje nižšiu čistotu, ale ponúka nižšie výrobné náklady.)
Extrakcia roztoku oxytocínu: Vezmite 100 g sušeného prášku zo zadnej hypofýzy a 30 g kremenného prášku, vložte ich do guľového mlyna a pridajte destilovanú vodu. Vykonajte extrakciu štyrikrát rovnakým postupom. Objemy destilovanej vody pridané pre každý krok sú nasledovné: 1,4 l pre prvé dve extrakcie a 1,3 l pre nasledujúce dve. Každá extrakcia sa vykonáva počas 45 minút, potom nasleduje centrifugácia, aby sa zachytila kvapalina; zostávajúci zvyšok sa potom podrobí ďalšej extrakcii. Štyri výsledné extrakty sa spoja, čím sa získa roztok oxytocínu. Zhrnutie: Sušený prášok zadnej hypofýzy [voda, guľový mlyn] → oxytocínový extrakt → chromatografická separácia.
Vezmite 1 500 g pred-upraveného syntetického zeolitu, pridajte 20 l 0,25 % roztoku kyseliny octovej a-po premiešaní-nalejte zmes do iónomeničovej-kolóny. Akonáhle hladina roztoku kyseliny octovej klesne na bod 2–3 cm nad povrchom zeolitového lôžka, ihneď pridajte oxytocínový extrakt. Udržujte primeranú prietokovú rýchlosť a zbierajte výsledný biely zakalený eluát (táto frakcia obsahuje predovšetkým oxytocín; keďže oxytocín má izoelektrický bod [pI] 7,7-, zatiaľ čo vazopresín má pí 10,9-vazopresín ľahko tvorí kladné ióny, a preto sa adsorbuje na kolónu). Hneď ako hladina kvapaliny v extrakte klesne na povrch zeolitového lôžka, ihneď pridajte destilovanú vodu a pokračujte v zbere zakaleného eluátu, kým sa nezastaví prietok. Upravte pH zozbieraného zakaleného eluátu na 3,5 pomocou ľadovej kyseliny octovej. Rýchlo zahrejte roztok vo vodnom kúpeli na 95 stupňov, udržiavajte túto teplotu 3 minúty, potom roztok rýchlo ochlaďte a ochlaďte cez noc. Zhrnutie: Extrakt oxytocínu [HAc, stĺpec syntetického zeolitu] → Kalný eluát [HAc, zahrievanie] → Oddelený roztok → Adsorpcia a elúcia. Nasledujúci deň prefiltrujte chladený roztok. K filtrátu sa za miešania pridá 10% bentonitová suspenzia (pridanie 3 ml suspenzie na 100 ml filtrátu). Pokračujte v miešaní počas 1 hodiny, aby sa uľahčila adsorpcia, potom sa zmes odstredí. Otestujte kvapalinu nad usadeninou pomocou roztoku činidla kyseliny sulfosalicylovej; neprítomnosť akejkoľvek zrazeniny naznačuje, že proces adsorpcie je ukončený. Ak adsorpcia nie je úplná, zopakujte proces úpravy bentonitu; následne sa spoja zrazeniny bentonitu získané z oboch adsorpčných krokov. Bentonit sa eluuje štyrikrát s použitím 1 % kyseliny octovej (s objemami 1,6 1, 1,4 1, 1,2 1 a 0,8 1, v tomto poradí). Pre každý eluát sa po zahriatí roztoku na 80 stupňov pridá *terc-butyltrichlorid; teplota sa potom zvýši na 95 stupňov, rýchlo sa ochladí na 25 stupňov a buď sa prefiltruje alebo odstredí. Štyri výsledné filtráty sa spoja, aby sa určila účinnosť a limit vazopresínu. Priebeh procesu je nasledovný: Chladený roztok [Filtrácia] → Filtrát [Bentonitová kaša] → Adsorbát [1 % HAc] → Eluát. Príprava injekcie oxytocínu:
Testovaný roztok oxytocínu, ktorý spĺňa štandardy kvality, sa zriedi na koncentráciu 5 U/ml alebo 10 U/ml. Potom sa prefiltruje cez lievik zo sintrovaného skla No{3}} alebo No{4}}, naplní sa do ampuliek a sterilizuje sa pomocou prúdiacej pary pri 100 stupňoch počas 30 minút, čím sa získa konečný produkt. Priebeh procesu je nasledujúci: Roztok oxytocínu (schválený testom) [Filtrácia, plnenie, sterilizácia] → Injekcia oxytocínu.
Regenerácia syntetického zeolitu: Syntetický zeolit sa dvakrát premyje destilovanou vodou. Potom sa pridá 1,5 1 vody (vypočítané na 500 g zeolitu) a 150 g chloridu sodného a zmes sa mieša 2 hodiny, aby sa vymyla a odstránil vazopresín. Zeolit sa potom premýva destilovanou vodou, kým nezostanú žiadne chloridové ióny. Pridá sa vhodné množstvo vody a pH sa upraví na 9 pomocou hydroxidu sodného; zmes sa mieša 30 minút, potom sa supernatant dekantuje. Zeolit sa premyje destilovanou vodou, pH sa upraví na 5,5 – 6 pomocou kyseliny sírovej a znova sa premyje vodou až do takmer neutrálnej reakcie. Potom sa prefiltruje, aby sa odstránila prebytočná voda, a vysuší sa pri teplote 105 stupňov pre budúce použitie. Pred použitím sa pridá vhodné množstvo vody a pomocou ľadovej kyseliny octovej sa za miešania upraví pH, aby sa umožnilo nasiaknutie. Príprava 10 % bentonitovej kaše: Bentonit a voda sa zmiešajú v pomere hmotnosti-k{18}}objemu 1:10. Zmes sa melie približne 1 hodinu, počas tejto doby sa pridáva kyselina octová, aby sa udržalo stabilné pH 3,5. Výsledná kaša sa potom uchováva v chladničke na budúce použitie. Spôsob 2: Chemická syntéza. Najprv sa syntetizuje heptapeptidamid (segmenty 3–9) vychádzajúc z benzyloxykarbonyl-leucínu *p*-nitrofenylesteru; ďalej sa syntetizuje benzyloxykarbonyl-S-benzylcysteín-tyrozín azid (segmenty 1–2); a v treťom kroku sa syntetizuje oxytocín.